产品目录

本制品是装填了MBPar Dextrin Agarose Resin 6FF的一种中压预装柱，规格5mL，预装柱具有标准接口，可以适配商品化的各类中压色谱系统，如ÄKTA等，方便客户操作。

MBPar Dextrin Agarose Resin是一种纯化带有麦芽糖结合蛋白(MBP)标签蛋白的亲和层析介质，MBP可促进连接蛋白的正确折叠，增加在细菌中过量表达的融合蛋白的溶解性，尤其是真核蛋白。MBPar Dextrin Agarose Resin 6FF可以一步纯化MBP融合蛋白，结合的融合蛋白可以用10mM麦芽糖进行温和洗脱，保护了目的蛋白的活性，MBP融合部分后续可用位点特异性蛋白酶切除。

此外，MBPar Dextrin Agarose Resin 6FF以高度交联的6%琼脂糖凝胶为基质，具有更高的物理化学特性，可以耐受更高的压力，在相对较高的流速下，实现对目的蛋白的纯化，更适于工业大规模蛋白的纯化。

• 结合/洗杂缓冲液：20mM Tris-HCl,200mM NaCl,1mM EDTA,pH7.4。
  
• 洗脱缓冲液：20mM Tris-HCl,1mM EDTA，10mM麦芽糖，pH7.4。

• 请勿冷冻保存本制品。
  
• 所有操作过程中，样本需要在4℃或冰上操作。
  
• 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

• 样品纯化(以Akta为例)
  
  • 准备：将泵管道中注满去离子水。去掉上塞子，将层析柱连接至色谱系统中。再折断下口，将预装柱接到色谱系统中，并旋紧。
    
  • 清洗：3～5倍柱体积去离子水冲洗层析柱中储存液。
    
  • 平衡：用5倍柱体积的结合Buffer平衡层析柱，使填料处于与目的蛋白相同的缓冲体系下，起到保护蛋白的作用。
    
  • 上样：将样品加到平衡好的层析柱中，推荐流速1～5mL/min，保证目的蛋白与树脂充分接触，提高目的蛋白的回收率，收集流出液，待检测。
    注：样品的粘度增加使得即使上样体积很少，也会导致层析柱很大的反压。上样量不要超过柱子的结合能力。大量的样品体积也可能造成很大的反压，使得进样器更难使用。
    
  • 洗杂：用10～15倍柱体积的洗杂Buffer进行清洗，直到紫外吸收达到一个稳定的基线，去除非特异性吸附的杂蛋白，收集洗杂液，待检测。
    
  • 洗脱：用洗脱Buffer采用一步法或线性梯度洗脱。一步洗脱中，通常5倍柱体积洗脱液足够将目的蛋白洗脱下来。也可以用一个小的梯度，例如20倍柱体积或更多，来分离不同结合强度的蛋白质。
    
  • 清洗及保存：依次使用3倍柱体积的结合Buffer和5倍柱体积的去离子水平衡填料，最后再用5倍柱体积的20%的乙醇平衡，然后保存在等体积的20%的乙醇中，置于4度保存，防止填料被细菌污染。
• SDS-PAGE检测
  将纯化过程中得到的样品(包括原始样品、流出组分、洗杂及洗脱组分等)利用SDS-PAGE进行检测，判定其纯化效果。
  
• 填料清洗
  随着非特异结合蛋白的增多和蛋白的聚集，会造成流速和结合载量性能下降，此时需对填料进行清洗。
  
  • 3倍柱体积的去离子水；
    
  • 3倍柱体积的0.1%SDS或0.5M NaOH溶液；
    
  • 3倍柱体积去离子水；
    
  • 3倍柱体积20%乙醇，保存于4℃。